TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 8108 : 2009

ISO 11285 : 2004

SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG LACTULOZA - PHƯƠNG PHÁP ENZYM

Milk - Determination of lactulose content - Enzymatic method

Lời nói đầu

TCVN 8108 : 2009 hoàn toàn tương đương với ISO 11285 : 2004;

TCVN 8108 : 2009 do Ban kỹ thuật tiêu chuẩn quốc gia TCVN/TC/F12 Sữa và sản phẩm sữa biên soạn, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng đề nghị, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

SỮA - XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG LACTULOZA - PHƯƠNG PHÁP ENZYM

Milk - Determination of lactulose content - Enzymatic method

1. Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp enzym để xác định hàm lượng lactuloza trong sữa.

2. Thuật ngữ và định nghĩa

Trong tiêu chuẩn này áp dụng thuật ngữ và định nghĩa sau đây:

2.1.

Hàm lượng lactuloza (lactulose content)

Khối lượng của các chất xác định được theo quy định trong tiêu chuẩn này.

CHÚ THÍCH Hàm lượng lactuloza được biểu thị theo số miligam trên kilogam.

3. Nguyên tắc

Chất béo và protein được kết tủa bằng cách bổ sung dung dịch kẽm sulfat và dung dịch kali hexaxyanoferat (II), sau đó lọc bỏ kết tủa. Lactoza và lactuloza lần lượt được thủy phân thành galactoza và glucoza hoặc galactoza và fructoza, khi có mặt enzym b-D-galactosidaza (b-gal). Từ lượng fructoza được giải phóng tính được lượng lactuloza.

lactoza + H₂O   galactoza + glucoza                           (1)

lactoza + H₂O   galactoza + fructoza                           (2)

Lượng lactoza có trong sữa cao hơn nhiều so với lactuloza. Vì vậy, glucoza sinh ra sau khi thủy phân sẽ gây nhiễu việc xác định fructoza. Do đó, hầu hết glucoza được oxy hóa thành axit gluconic bởi glucoza oxidaza (GOD) với sự có mặt của oxy:

glucoza + H₂O + O₂  axit gluconic + H₂O₂                      (3)

Bằng phương pháp này có thể xác định những lượng nhỏ lactuloza khi có mặt một lượng vượt trội lactoza. Hydro peroxit sinh ra trong phản ứng (3) được phân hủy bởi catalaza. Phản ứng này được sử dụng để cung cấp khí oxy cho phản ứng oxy hóa glucoza:

2 H₂O₂   2 H₂O + O₂                                                  (4)

Lượng glucoza chưa bị oxy hóa còn lại và lượng fructoza sinh ra từ phản ứng thủy phân lactuloza được phosphoryl hóa bằng cách sử dụng adenozin triphosphat (ATP) với sự có mặt của hexokinaza (HK) để tạo ra glucoza-6-phosphat và fructoza-6-phosphat tương ứng.

glucoza + ATP  glucoza-6-phosphat + ADP                   (5)

fructoza + ATP  fructoza-6-phosphat + ADP                  (6)

Glucoz