Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14435:2025 (hoàn toàn tương đương với BS EN 17250:2020) quy định phương pháp xác định hàm lượng ochratoxin A trong các loại gia vị, cam thảo, cacao và các sản phẩm từ cacao. Phương pháp này sử dụng kỹ thuật làm sạch bằng cột ái lực miễn nhiễm (IAC) kết hợp với sắc ký lỏng hiệu năng cao sử dụng detector huỳnh quang (HPLC–FLD), giúp đảm bảo độ nhạy, độ chính xác và độ tin cậy cao trong kiểm nghiệm an toàn thực phẩm.

- Phạm vi và đối tượng áp dụng

• Đối tượng áp dụng: Tiêu chuẩn này áp dụng đối với các phòng thử nghiệm thực phẩm, cơ quan kiểm tra chất lượng nhà nước, các doanh nghiệp sản xuất, chế biến, xuất nhập khẩu gia vị, cam thảo, cacao và các sản phẩm liên quan.
• Phạm vi áp dụng: Xác định hàm lượng ochratoxin A (OTA) trong các nền mẫu thực phẩm có tính chất phức tạp bao gồm các loại gia vị (như ớt bột, tiêu đen, tiêu trắng, gừng, nghệ), cam thảo và các sản phẩm từ cam thảo (rễ cam thảo, chiết xuất cam thảo), cacao và các sản phẩm từ cacao (bột cacao, sô cô la đen, sô cô la sữa).

- Tài liệu viện dẫn (Điều 2)

• Việc áp dụng tiêu chuẩn này đòi hỏi phải viện dẫn các tài liệu kỹ thuật liên quan để đảm bảo tính đồng bộ trong thao tác thí nghiệm. Đối với các tài liệu viện dẫn ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu. Đối với các tài liệu viện dẫn không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung (nếu có).

- Nguyên tắc của phương pháp (Điều 3)

• Chiết xuất mẫu: Ochratoxin A trong mẫu thử được chiết xuất bằng dung môi thích hợp (thường là hỗn hợp dung môi hữu cơ phân cực và nước hoặc dung dịch đệm thích hợp) để hòa tan tối đa độc tố và hạn chế tối thiểu việc kéo theo các tạp chất không mong muốn.
• Làm sạch bằng cột ái lực miễn nhiễm (IAC): Dịch chiết sau khi được pha loãng bằng dung dịch đệm thích hợp sẽ được cho đi qua cột ái lực miễn nhiễm chứa các kháng thể đơn dòng đặc hiệu với ochratoxin A. Độc tố ochratoxin A sẽ liên kết chọn lọc với các kháng thể trên cột, trong khi các tạp chất khác được rửa trôi hoàn toàn bằng nước hoặc dung dịch rửa thích hợp.
• Giải hấp hấp phụ: Ochratoxin A sau đó được giải hấp khỏi cột ái lực miễn nhiễm bằng dung môi rửa giải mạnh (thường là metanol hoặc hỗn hợp dung môi chứa metanol) để thu hồi hoàn toàn lượng độc tố đã bám trên cột.
• Xác định bằng HPLC-FLD: Dịch rửa giải được tiêm vào hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) sử dụng cột pha đảo để phân tách ochratoxin A. Hàm lượng độc tố được định lượng bằng detector huỳnh quang (FLD) ở các bước sóng kích thích và bước sóng phát xạ đặc trưng cho ochratoxin A.

- Thuốc thử và thiết bị, dụng cụ (Điều 4)

• Yêu cầu về thuốc thử: Tất cả các hóa chất, dung môi sử dụng phải đạt độ tinh khiết phân tích hoặc dùng cho sắc ký lỏng (HPLC). Nước sử dụng phải là nước cất hai lần hoặc nước có độ tinh khiết tương đương. Chất chuẩn ochratoxin A phải có chứng nhận nguồn gốc rõ ràng và được xác định nồng độ chính xác trước khi pha chế các dung dịch chuẩn làm việc.
• Yêu cầu về thiết bị và dụng cụ: Hệ thống HPLC phải được trang bị detector huỳnh quang có khả năng thiết lập bước sóng kích thích (khoảng 333 nm) và bước sóng phát xạ (khoảng 460 nm). Cột ái lực miễn nhiễm (IAC) phải có dung lượng liên kết tối thiểu đáp ứng yêu cầu của tiêu chuẩn và có hiệu suất thu hồi cao đối với các nền mẫu thử nghiệm. Các thiết bị phụ trợ khác bao gồm máy đồng hóa mẫu, máy ly tâm, bộ lọc màng và các dụng cụ thủy tinh chuẩn phòng thí nghiệm.

- Hiệu lực thi hành

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 14435:2025 có hiệu lực kể từ ngày ban hành theo quyết định của cơ quan quản lý nhà nước có thẩm quyền về khoa học và công nghệ. Việc áp dụng tiêu chuẩn này góp phần chuẩn hóa phương pháp kiểm nghiệm độc tố vi nấm ochratoxin A, hỗ trợ đắc lực cho công tác kiểm soát an toàn thực phẩm và thúc đẩy hoạt động xuất nhập khẩu nông sản, thực phẩm của Việt Nam.