TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 13277:2021

THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ α-AMYLASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ

Foodstuffs - Determination of α-amylase activity by spectrophotometric method

Lời nói đầu

TCVN 13277:2021 được xây dựng trên cơ sở tham khảo AOAC 2002.01 Measurement of α-amylase activity in white wheat flour, milled malt, and microbial enzyme preparations. Ceralpha assay;

TCVN 13277:2021 do Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

THỰC PHẨM - XÁC ĐỊNH HOẠT ĐỘ α-AMYLASE BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ

Foodstuffs - Determination of α-amylase activity by spectrophotometric method

1  Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp xác định hoạt độ α-amylase trong bột mì trắng, bột mạch nha, chế phẩm enzym có nguồn gốc từ nấm và vi khuẩn bằng kỹ thuật quang phổ UV-VIS dựa trên đơn vị Ceralpha.

Các kết quả nghiên cứu liên phòng thử nghiệm được nêu trong Phụ lục A.

2  Thuật ngữ và định nghĩa

Trong tiêu chuẩn này sử dụng thuật ngữ và định nghĩa sau đây:

2.1

Đơn vị Ceralpha (Ceralpha unit)

CU

Lượng α-amylase xúc tác để giải phóng 1 μmol p-nitrophenol trong thời gian 1 min từ cơ chất p-nitrophenyl maltoheptaosidase bị khóa một đầu, ở nhiệt độ 40 °C, với sự có mặt lượng dư α-glucosidase bền nhiệt.

3  Nguyên tắc

Mẫu thử được chiết bằng dung dịch muối hoặc dung dịch đệm ở nhiệt độ phòng hoặc ở 40 °C. Ly tâm hoặc lọc phần dịch chiết để thu được dịch trong, sau đó pha loãng. Phần dịch chiết đã pha loãng được ủ cùng hỗn hợp cơ chất trong điều kiện pH, nhiệt độ và thời gian xác định. Cơ chất là p-nitrophenyl maltoheptaoside (BPNPG7) bị khóa đầu không khử cùng các lượng dư α-glucosidase bền nhiệt. Nhóm bị khoá trong BPNPG7 ngăn sự thủy phân của cơ chất này do sự xúc tác của các exo-enzym như amyloglucosidase, α-glucosidase, hoặc β-amylase. Khi cơ chất bị phân tách do sự xúc tác của endo-α-amylase, nitrophenyl oligosaccharide bị thủy phân hoàn toàn thành p-nitrophenol và glucose tự do. Sau đó, tạo phản ứng màu phenolat bằng cách thêm dung dịch kiềm và đo độ hấp thụ ở bước sóng 400 nm.

4  Thuốc thử

Chỉ sử dụng các thuốc thử tinh khiết phân tích, sử dụng nước cất hoặc nước đã khử ion hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định khác.

4.1  Dung dịch đệm natri malat đậm đặc, 1 M, pH 5,4

Hòa tan 134,1 g