TIÊU CHUẨN QUỐC GIA

TCVN 11063:2016

THỰC PHẨM CHỨC NĂNG - XÁC ĐỊNH TỔNG HÀM LƯỢNG ISOFLAVON ĐẬU TƯƠNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Dietary supplements - Determination of total soy isoflavones content by high performance liquid chromatographic method

Lời nói đầu

TCVN 11063:2016 được xây dựng trên cơ sở AOAC 2008.03 Total soy isoflavones in dietary supplements, supplement ingredients, and soy foods. High-performance liquid chromatography with ultraviolet detection;

TCVN 11063:2016 do Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia biên soạn, Bộ Y tế đề nghị, Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường Chất lượng thẩm định, Bộ Khoa học và Công nghệ công bố.

THỰC PHẨM CHỨC NĂNG - XÁC ĐỊNH TỔNG HÀM LƯỢNG ISOFLAVON ĐẬU TƯƠNG BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO

Dietary supplements - Determination of total soy isoflavones content by high performance liquid chromatographic method

1  Phạm vi áp dụng

Tiêu chuẩn này quy định phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector UV để xác định hàm lượng từng isoflavon và tổng hàm lượng isoflavon có nguồn gốc từ đậu tương trong nguyên liệu và sản phẩm thực phẩm chức năng.

Tiêu chuẩn này không áp dụng cho thực phẩm chức năng và các sản phẩm khác có chứa cỏ ba lá đỏ (Trifolium pratense L) hoặc sắn dây [Pueraria lobata (Willd.) Ohwi] vì chúng chứa một số loại isoflavon không có trong đậu tương. Các thực phẩm chức năng chứa apigenin không xác định được vì trong phương pháp này apigenin được sử dụng làm chất chuẩn nội.

Giới hạn định lượng của phương pháp đối với hàm lượng isoflavon tổng số là 0,5 mg/g.

2  Nguyên tắc

Mẫu thử được bổ sung chất chuẩn nội và chiết bằng hỗn hợp axetonitril (3.1) : nước : dimetyl sulfoxit (3.4) (tỷ lệ thể tích 58,5 : 39,0 : 2,5) ở nhiệt độ phòng trong thời gian 1 h. Dịch chiết được pha loãng với nước để làm giảm nồng độ dung môi hữu cơ, sau đó được ly tâm, lọc để loại bỏ các chất không tan. Phân tích dịch thu được trên hệ thống HPLC với detector UV tại bước sóng 260 nm, pha tĩnh là cột C18 pha đảo, pha động là hỗn hợp axetonitril: nước, rửa giải theo gradient. Tổng hàm lượng isoflavon được tính từ 12 chất: malonyl daidzin, malonyl glycitin, malonyl genistin, axetyl daidzin, axetyl glycitin, axetyl genistin, daidzin, glycitin, genistin, daidzein, glycitein, genistein. Đương lượng aglycon của daidzein, glycitein, genistein cũng được tính từ 12 chất trên, sử dụng ba chất chuẩn isoflavon glucosid và ba chất chuẩn isoflavon aglucon. Hệ số đáp ứng của isoflavon dạng malonyi và axetyl được tính từ hệ số đáp ứng của isoflavon glucosid.

3  Thuốc thử

Tất cả thuốc thử được sử dụng phải là loại tinh khiết phân tích, dùng cho sắc ký lỏng hiệu năng cao hoặc có chất lượng tương đương. Nước sử dụng là nước đã loại ion, được lọc qua màng lọc 0,45 μm hoặc nước có độ tinh khiết tương đương, trừ khi có quy định khác.

3.1  Axetonitril.

3.2  n-Hexan.

3.3  Axit phosphoric,