Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13045:2020 về Thức ăn chăn nuôi - Phân lập và định lượng Pediococcus spp. quy định phương pháp thống nhất nhằm phát hiện, phân lập và xác định số lượng vi khuẩn thuộc chi Pediococcus trong các sản phẩm thức ăn chăn nuôi. Đây là tiêu chuẩn kỹ thuật quan trọng giúp các cơ quan quản lý và doanh nghiệp kiểm soát chất lượng vi sinh vật, đặc biệt là các chủng lợi khuẩn được bổ sung vào thức ăn chăn nuôi.

Phạm vi và đối tượng áp dụng

• Phạm vi áp dụng: Tiêu chuẩn này áp dụng đối với tất cả các loại thức ăn chăn nuôi, bao gồm thức ăn hỗn hợp, thức ăn đơn, premix và các nguyên liệu sản xuất thức ăn chăn nuôi có chứa hoặc nghi ngờ có chứa vi khuẩn Pediococcus spp.
• Đối tượng áp dụng: Các phòng thử nghiệm vi sinh, cơ quan kiểm định chất lượng, các tổ chức chứng nhận hợp chuẩn hợp quy, cùng các cá nhân, tổ chức hoạt động trong lĩnh vực sản xuất, kinh doanh và nhập khẩu thức ăn chăn nuôi tại Việt Nam.

Nội dung cốt lõi của các điều khoản đầu (Từ Điều 1 đến Điều 4)

Điều 1: Phạm vi áp dụng

• Quy định chi tiết phương pháp phân lập và định lượng vi khuẩn Pediococcus spp. bằng kỹ thuật đếm khuẩn lạc ở nhiệt độ 37 độ C (hoặc nhiệt độ thích hợp khác tùy thuộc vào đặc tính sinh học của chủng cụ thể).
• Phương pháp này được thiết kế để áp dụng cho các sản phẩm thức ăn chăn nuôi thương mại và các mẫu môi trường lấy từ khu vực sản xuất, chế biến thức ăn chăn nuôi nhằm kiểm soát nhiễm chéo.

Điều 2: Tài liệu viện dẫn

• Tiêu chuẩn này viện dẫn các tài liệu kỹ thuật cốt lõi về yêu cầu chung đối với việc thử nghiệm vi sinh vật trong thực phẩm và thức ăn chăn nuôi, đặc biệt là các tiêu chuẩn về chuẩn bị mẫu thử, huyền phù ban đầu và các dung dịch pha loãng thập phân (như TCVN 6404 hoặc các tiêu chuẩn ISO tương đương).
• Nguyên tắc áp dụng tài liệu viện dẫn: Đối với các tài liệu ghi năm công bố thì áp dụng bản được nêu; đối với tài liệu không ghi năm công bố thì áp dụng phiên bản mới nhất, bao gồm cả các sửa đổi, bổ sung.

Điều 3: Thuật ngữ và định nghĩa

• Pediococcus spp.: Được định nghĩa là các vi khuẩn hình cầu (cầu khuẩn), Gram dương, không sinh bào tử, phản ứng xúc tác (catalase) âm tính, thường sắp xếp thành cặp hoặc nhóm bốn (tetrad), có khả năng sinh trưởng mạnh mẽ trong môi trường thạch chuyên biệt dưới điều kiện nuôi cấy thích hợp.
• Định lượng Pediococcus spp.: Là việc xác định số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) của vi khuẩn Pediococcus spp. trên một đơn vị khối lượng (gam) hoặc thể tích (mililít) mẫu thử nghiệm, dựa trên các điều kiện nuôi cấy được quy định cụ thể trong tiêu chuẩn.

Điều 4: Nguyên tắc thực hiện

• Chuẩn bị mẫu và pha loãng: Tiến hành đồng nhất mẫu thử với dung dịch pha loãng thích hợp để tạo thành huyền phù ban đầu, sau đó thực hiện các bước pha loãng thập phân liên tiếp nhằm đạt được nồng độ vi khuẩn tối ưu cho việc cấy đĩa.
• Cấy và nuôi cấy: Sử dụng môi trường chọn lọc chuyên biệt (thường là môi trường MRS agar hoặc môi trường tương đương có bổ sung các chất ức chế vi sinh vật không mong muốn). Tiến hành cấy bề mặt hoặc cấy sâu, sau đó ủ ấm các đĩa thạch trong điều kiện khí trường thích hợp (thường là vi hiếu khí hoặc kị khí) ở nhiệt độ và thời gian quy định.
• Tính toán kết quả: Đếm số lượng khuẩn lạc đặc trưng xuất hiện trên các đĩa thạch chọn lọc sau thời gian ủ. Tiến hành khẳng định sinh hóa nếu cần thiết và tính toán mật độ Pediococcus spp. có trong mẫu ban đầu dựa trên số lượng khuẩn lạc đếm được và hệ số pha loãng tương ứng.

Hiệu lực thi hành

Tiêu chuẩn quốc gia TCVN 13045:2020 có hiệu lực kể từ ngày công bố. Tiêu chuẩn này thiết lập một quy trình kỹ thuật chuẩn hóa, giúp đồng bộ hóa phương pháp thử nghiệm tại các phòng kiểm nghiệm trên toàn quốc, đảm bảo tính chính xác và khách quan trong việc đánh giá chất lượng thức ăn chăn nuôi.